1)無菌室應設有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應達到10000級，室內溫度保持在20～24攝氏度左右，濕度保持在45%~60%之間。超凈臺潔凈度應達到100級。
2)無菌室應保持清潔,嚴禁堆放雜物，以防污染。
3)嚴防一切滅菌器材和培養基污染，已污染者應停止使用。
4)無菌室應備有工作濃度的消毒液，如質量分數為5%的甲酚溶液，質量分數為70%的酒精，質量分數0.1%的新潔爾滅溶液等。
5)無菌室應定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。
6)需要帶人無菌室使用的儀器、器械、器皿等一切物品，均應包扎嚴密，并應經過適宜的方法滅菌。
7)工作人員進人無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換專用工作服、鞋、帽子、口罩和手套（或用質量分數為70%的乙醇再次擦拭雙手），方可進入無菌室進行操作。
8)無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30min以上，并且同時打開超凈臺進行吹風。操作完畢，應及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌20min。
9)供試品在檢查前，應保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用質量分數為70%的酒精棉球消毒外表面。
10)每次操作過程中，均應做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。
11)吸取菌液時，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。
12)接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養物。
13)帶有菌液的吸管、試管、培養皿等器皿應浸泡在盛有質量分數為5%的來蘇爾溶液的消毒桶內消毒，24h后取出沖洗。
14)如有菌液灑在桌上或地上，應立即用質量分數為5%的石炭酸溶液或質量分數為
3%的來蘇爾傾覆在被污染處至少30min,再作處理。工作衣帽等受到菌液污染時，應立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。
15)凡帶有活菌的物品，必須經消毒后，才能在水龍頭下沖洗,嚴禁污染下水道。
16)無菌室應每月檢查菌落數。在超凈工作臺開啟的狀態下，取內徑90mm的無菌培養。
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